Diminuição dos Níveis Séricos do Receptor Solúvel da Oncostatina M (sOSMR) e Glicoproteína 130 (sgp130) em Pacientes com Doença Arterial Coronariana / Decreased Serum Levels of Soluble Oncostatin M Receptor (sOSMR) and Glycoprotein 130 (sgp130) in Patients with Coronary Artery Disease

Resumo Fundamento A oncostatina M (OSM) é uma citocina pleiotrópica que, após lesão arterial, demonstra ser expressa rapidamente. Objetivos Correlacionar os níveis séricos da OSM, do receptor solúvel de oncostatina M (sOSMR) e da fração solúvel de glicoproteína 130 (sgp130) em pacientes com doença arterial coronariana (DAC) a parâmetros clínicos. Métodos Os níveis de sOSMR e sgp130 foram avaliados por ELISA, enquanto os de OSM foram avaliados por Western Blot, em pacientes com SCC (n=100), pacientes com SCA (n=70) e 64 voluntários do grupo de controle sem manifestações clínicas da doença. Valores de p <0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Resultados Pacientes com DAC exibiram níveis significativamente mais baixos de sOSMR e sgp130 e níveis mais altos de OSM em comparação ao grupo de controle (ambos p <0,0001). A análise clínica mostrou níveis mais baixos de sOSMR em homens ([OR] = 2,05, p = 0,026), jovens (OR = 1,68, p = 0,0272), hipertensos (OR = 2,19, p = 0,041), fumantes (OR = 2,19, p = 0,017), pacientes que não apresentavam dislipidemia (OR = 2,32, p = 0,013), pacientes com infarto agudo do miocárdio [IAM] (OR = 3,01, p = 0,001) e pacientes não tratados com estatina (OR = 1,95, p = 0,031), antiplaquetário (OR = 2,46, p = 0,005), inibidores dos canais de cálcio (OR = 3,15, p = 0,028) e antidiabéticos (OR = 2,97, p = 0,005). Os níveis de sOSMR também foram correlacionados a sexo, idade, hipertensão e uso de medicamentos na análise multivariada. Conclusões Nossos dados sugerem que o aumento dos níveis séricos de OSM e a diminuição dos níveis de sOSMR e sGP130 em pacientes com injúria cardíaca podem desempenhar um papel importante no mecanismo fisiopatológico da doença. Além disso, níveis mais baixos de sOSMR foram associados a sexo, idade, hipertensão e uso de medicamentos.

Abstract Background Oncostatin M (OSM) is a pleiotropic cytokine which, after arterial injury, has proven to be to be rapidly expressed. Objectives To correlate the serum levels of OSM, soluble OSM receptor (sOSMR), and soluble fraction of glycoprotein 130 (sgp130) in patients with coronary artery disease (CAD) with clinical parameters. Methods Levels of sOSMR and sgp130 were evaluated by ELISA and OSM by Western Blot, in patients with CCS (n=100), patients with ACS (n=70), and 64 control volunteers without clinical manifestations of the disease. P-values < 0.05 were considered to be statistically significant. Results CAD patients exhibited significantly lower levels of sOSMR and sgp130 and higher levels of OSM when compared to the controls (both p < 0.0001). Clinical analysis displayed, lower levels of sOSMR in men ([OR] = 2.05, p = 0.026), youth (OR = 1.68, p = 0.0272), hypertensives (OR = 2.19, p = 0.041), smokers (OR = 2.19, p = 0.017), patients that did not present dyslipidemia (OR = 2.32, p = 0.013), patients with Acute Myocardial Infarction [AMI] (OR = 3.01, p = 0.001) and patients not treated with statin (OR = 1.95, p = 0.031), antiplatelet agent (OR = 2.46, p = 0.005), inhibitors of calcium channels (OR = 3.15, p = 0.028), and antidiabetic drugs (OR = 2.97, p = 0.005). The levels of sOSMR were also correlated with gender, age, hypertension, and use of medications in multivariate analysis. Conclusions Our data suggest that the enhanced serum levels of OSM, and decreased levels of sOSMR and sGP130 in patients with cardiac injury may play an important role in the pathophysiological mechanism of the disease. Furthermore, lower levels of sOSMR were associated with gender, age, hypertension, and the use of medications.

Molecular study of sticky platelet syndrome using exorne sequencing / Estudio molecular del síndrome de plaqueta pegajosa mediante secuenciación del exoma

Abstract Introduction: Sticky platelet syndrome (SPS) is a prothrombotic condition characterized by increased platelet aggregation that causes arterial and venous thrombosis. Its diagnosis is reached by identifying increased aggregation using low concentrations of adenosine diphosphate and epinephrine in platelet aggregation tests. Objectives: To identify common mutations through exome sequencing in two patients from the same family diagnosed with SPS and, thus, contribute to the molecular study of this disease. Materials and methods: Descriptive study. In January 2018, exome sequencing was performed in a 10-year-old patient treated at Fundación HOMI (Bogotá D.C., Colombia), index case, and in one of his adult first-degree relatives, both with a history of thrombotic disease and diagnosed with SPS. Exome sequencing was performed at the Complexo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela (Spain) using the SureSelect Clinical Research Exome V2 software by Agilent. Results: Exome sequencing led to detect genetic variants in both cases when compared with the reference sequence. The following variant was identified in the two samples: a cytosine to thymine transition at position c.236 (NM_000174.4) of the glycoprotein (GP)Ib-IX-V complex platelet membrane receptor, which causes a heterozygous transition of the amino acid threonine to isoleucine (i.e., a transition from hydrophilic amino acid to a hydrophobic amino acid) at position p. 79 of the extracellular leucine-rich repeat domain of GPIba subunit of the (GP)Ib-IX complex, involving a conformational change of the main receptor of ligands IB alpha, which might result in platelet hyperaggregation and thrombosis. This variant has not been described in patients with SPS to date. Conclusion: The mutation identified in both samples could be related to SPS considering the importance of glycoprotein IX in platelet function.

Resumen Introducción. El síndrome de plaqueta pegajosa (SPP) es una condición protrombótica caracterizada por un incremento de la agregabilidad plaquetaria que causa trombosis arterial y venosa. Su diagnóstico se realiza al identificar el aumento de la agregabilidad utilizando bajas concentraciones de adenosín difosfato y epinefrina en pruebas de agregación plaquetaria. Objetivos. Identificar mutaciones comunes mediante secuenciación del exoma en dos pacientes de una misma familia con diagnóstico de SPP y, de esta forma, contribuir al estudio molecular de esta enfermedad. Materiales y métodos. Estudio descriptivo en el que se realizó secuenciación del exoma en un paciente de 10 años atendido en la Fundación HOMI (Bogotá, Colombia), caso índice, y en uno de sus familiares adultos en primer grado, ambos con antecedente de enfermedad trombótica y diagnosticados con SPP. La secuenciación del exoma se realizó en el Complexo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela (España) con el programa SureSelect Clinical Research Exome V2 de Agilent. Resultados. En la secuenciación del exoma se detectaron variantes genéticas en ambos casos en comparación con la secuencia de referencia. En las muestras de ambos pacientes se identificó una variante heterocigota consistente en una transición de citosina a timina en la posición c.236 (NM_000174.4) que provoca el cambio del aminoácido treonina por isoleucina en la posición p.79 del dominio extracelular repetitivo rico en leucina (subunidad GPIba del complejo de la glicoproteína Ib-IX-V) y que podría provocar el cambio conformacional del receptor principal del ligando Ib alfa, así como hiperagregación plaquetaria y trombosis. Esta variante no ha sido descrita previamente en pacientes con SPP. Conclusión. La mutación identificada en las muestras estudiadas podría estar relacionada con el SPP considerando la importancia de la glicoproteína IX en las funciones plaquetarias.

Identification of glycoproteins in mucous cells of the gill epithelium of Colossoma macropomum after exposure to organophosphate / Identificação das glicoproteínas nas células mucosas do epitélio branquial de Colossoma macropomum após exposição ao organofosforado

The use of organophosphates has been recommended for fish, especially the trichlorfon to control parasites. Colossoma macropomum were exposed to trichlorfon during 96 hours and of total number of mucous cells decreased in the number of cells when compared to the control group. Glycoproteins acid, acid sulphated and neutral was identified in the gill epithelium. Neutra glycoprotein had a significant decrease between control and the sublethal concentration. Acid glycoprotein didn't have any significant difference between the groups exposed to the trichlorfon, compared to the control group. Sulfated acidic glycoprotein in the group exposed to the trichlorfon was noticed a reduction in number of mucosal cells acidic sulphated. The differences between density cell and production glycoprotein was a response of these cells after exposure to xenobiotic. The reduction of neutral, acid and sulphated acid glycoprotein in the MC of the gill epithelium Colossoma macropomum may affect gills epithelial surface protection by reducing the formation of an unstirred layer and enhance the ion loss.(AU)

A utilização de organofosforados tem sido recomendada em pisciculturas, principalmente o trichlorfon, para o controle de parasitoses. Colossoma macropomum foram expostos ao trichlorfon durante 96 horas, e o número total de células mucosas diminuiu no número de células quando comparado com o grupo controle. Glicoproteínas ácida, ácida sulfatada e neutra foram identificadas no epitélio branquial. Glicoproteína neutra teve uma diminuição significativa entre o controle e a concentração subletal. Glicoproteína ácida não apresentou diferença significativa entre os grupos expostos ao triclorfon, em comparação com o grupo controle. Glicoproteína ácida sulfatada no grupo exposto ao triclorfon teve uma redução no número de células da mucosa ácida sulfatada. As diferenças entre a densidade celular e a produção de glicoproteína foi uma resposta dessas células após exposição aos xenobióticos. A redução das glicoproteínas neutra, ácida e ácida sulfatada no epitélio branquial de Colossoma macropomum pode afetar a proteção da superfície, reduzindo a formação de uma camada de muco, e aumentar a perda de íons.(AU)

Gene mutations of platelet glycoproteins and response to tirofiban in acute coronary syndrome / Mutações gênicas das glicoproteínas plaquetárias e resposta ao tirofiban na síndrome coronariana aguda

CONTEXT AND OBJECTIVES: Glycoprotein inhibitors (abciximab, eptifibatide and tirofiban) are used in patients with unstable angina and non-ST-segment elevation myocardial infarction before percutaneous coronary intervention. Of these, tirofiban is the least effective. We hypothesized that the response to tirofiban might be associated with glycoprotein gene mutations. DESIGN AND SETTING: Prospective study at Emergency Unit, Heart Institute (InCor), University of São Paulo. METHOD: Intrahospital evolution and platelet aggregation in response to tirofiban were analyzed in relation to four glycoprotein mutations in 50 patients indicated for percutaneous coronary intervention: 17 (34%) with unstable angina and 33 (66%) with non-ST-segment elevation myocardial infarction. Platelet aggregation was analyzed using the Born method. Blood samples were obtained before and one hour after tirofiban infusion. Glycoproteins Ia (807C/T ), Ib (Thr/Met) , IIb (Ile/Ser ) and IIIa (PIA ) were the mutations selected. RESULTS: Hypertension, dyslipidemia, diabetes, smoking, previous coronary artery disease and stroke were similar between the groups. Mutant glycoprotein IIIa genotypes had lower platelet aggregation before tirofiban administration than that of the wild genotype (41.0% ± 22.1% versus 55.9% ± 20.8%; P = 0.035). Mutant glycoprotein IIIa genotypes correlated moderately with lower platelet inhibition (r = -0.31; P = 0.030). After tirofiban administration, platelet glycoprotein Ia, Ib, IIb and IIIa mutations did not influence the degree of inhibition of platelet aggregation or intrahospital mortality. CONCLUSIONS: Mutations of glycoproteins Ia, Ib, IIb and IIIa did not influence platelet aggregation in response to tirofiban in patients with unstable angina and non-ST-segment elevation myocardial infarction.

RESUMO CONTEXTO E OBJETIVOS: Inibidores da glicoproteína (abciximab, eptifibatide, tirofiban) são utilizados em pacientes com angina instável e infarto do miocárdio sem elevação do segmento ST (IAMSSST) antes da intervenção coronária percutânea. Dentre eles, o tirofiban é o menos eficaz. Nossa hipótese é que a resposta ao tirofiban possa estar associada a mutações no gene da glicoproteína. DESENHO E LOCAL: Estudo prospectivo na Unidade de Emergência do Instituto do Coração (InCor), Universidade de São Paulo (USP). MÉTODOS: Foram analisadas a evolução intra-hospitalar e agregabilidade plaquetária em resposta ao tirofiban de 4 mutações da glicoproteína em 50 pacientes com indicação para intervenção coronária percutânea, 17 (34%) com angina instável e 33 (66%) com IAMSSST. A agregação plaquetária foi analisada pelo método de Born. Amostras de sangue foram obtidas antes e uma hora após infusão do tirofiban. As glicoproteínas Ia (807C/T ), Ib (Thr/Met ), IIb (Ile/Ser ) e IIIa (PIA ) foram as mutações selecionadas. RESULTADOS: Hipertensão, dislipidemia, diabetes, tabagismo, doença coronariana e acidente vascular cerebral prévios foram semelhantes entre os grupos. Observou-se menor agregabilidade plaquetária dos genótipos mutantes da glicoproteína IIIa antes da administração de tirofiban do genótipo selvagem (41% ± 22% versus 56% ± 21%; P = 0,035). Genótipos mutantes da glicoproteína IIIa correlacionaram-se moderadamente com menor inibição plaquetária (r = -0,31; P = 0,030). Após a administração tirofiban, as mutações das glicoproteínas Ia, Ib, IIb, e IIIa não influenciaram o grau de inibição da agregação plaquetária e mortalidade intra-hospitalar. CONCLUSÕES: Mutações das glicoproteínas Ia, Ib, IIb e IIIa não influenciaram a agregação plaquetária em resposta ao tirofiban nos pacientes com angina instável e IAMSSST.

Evaluation of a bovine pregnancy-associated glycoprotein enzyme-linked immunosorbent assay kit for serological diagnosis of pregnancy in sheep / Avaliação de um kit de ensaio imunoenzimático na detecção de glicoproteínas associadas à prenhez bovina para o diagnóstico sorológico de gestação em ovinos

ABSTRACT: Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no longer detected from 21 days post-partum. The evaluated ELISA test is a reliable tool for pregnancy diagnosis in sheep at random stages and as a complementary exam at early gestation.

RESUMO: O diagnóstico de gestação é uma ferramenta importante no manejo da propriedade. A ultrassonografia é a principal técnica utilizada no diagnóstico de prenhez em ovelhas. Como alternativa, o radiomunoensaio (RIA) permite acurácia e a detecção precoce de proteínas associadas à prenhez (PAGs) no sangue. No entanto, as técnicas radioativas, como o RIA, têm sido cada vez mais desaconselháveis, devido ao risco ambiental. A homologia entre PAGs de ovinos e bovinos é alta, e os kits de ELISA utilizados para a detecção de PAGs em bovinos são mais seguros do que RIA. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de detecção de PAGs no soro ovino para diagnóstico de gestação em soro ovino, utilizando um kit de ELISA produzido para bovinos. A sensibilidade e a especificidade do kit de ELISA foram de 93,5% e 98,9%, respectivamente, enquanto que os valores preditivos positivo e negativo foram de 99,0% e 93,1%, respectivamente, em comparação com a ultrassonografia (utilizada como referência). As PAGs atingiram concentrações consistentemente detectáveis no soro ovino em torno de 33 dias após o acasalamento. A acurácia do teste de ELISA foi de 96,1% a partir de 33 dias de gestação até o parto. As PAGs ainda eram detectáveis sete dias pós-parto. No entanto, a partir de 21 dias após o parto, as PAGs da prenhez anterior já não eram detectadas no soro. Em conclusão, o kit de ELISA bovino pode detectar a prenhez com precisão em ovelhas a partir de 33 dias após o acasalamento, e os níveis de PAGs da gestação anterior não são detectados a partir de 21 dias pós-parto. O teste de ELISA avaliado é uma ferramenta confiável para o diagnóstico de gestação em ovelhas em estágios aleatórios e como exame complementar no início da gestação.

Outbreaks of canid herpesvirus 1 disease in puppies in southern Brazil / Surtos de doença por herpesvírus canino 1 em filhotes de cães no sul do Brasil

Canid herpesvirus 1 (CHV-1) is a widespread pathogen of dogs and produces infertility, abortions and severe systemic disease in young puppies. Clinical data indicate the circulation of CHV-1 among Brazilian dogs yet definitive diagnosis has rarely been accomplished. This article describes the clinicopathological findings of four independent cases/outbreaks of neonatal disease by CHV-1 in Bulldog puppies followed by virus identification and genetic characterization. Three events occurred in a kennel holding dogs of different breeds at reproductive age (March 2013, October 2013 and April 2014). Puppies from three French or English Bulldog litters, aging 9 to 30 days were affected, presenting dyspnea, agonic breathing, pale mucous, abdominal pain and tension, evolving to death within about 24 hours. At necropsy, the puppies presented necrohemorrhagic hepatitis, multifocal and moderate necrohemorrhagic nephritis and fibrinonecrotic interstitial pneumonia. Virus isolation was positive in clinical specimens from one litter and CHV-1 DNA was detected by PCR in tissues from all four cases. Virus-neutralizing assays with samples of the affected kennel revealed 9/12 adult animals with high antibody titers to CHV-1. Nucleotide sequencing of glycoprotein B, C and D genes revealed 99-100% of identity among the viruses and with CHV-1 sequences available in GenBank. Phylogenetic analyses of gC sequences showed a segregation of the samples, even among three isolates from the same kennel. These findings support CHV-1 infection as the cause of disease and death in these dog litters, reinforcing the need for correct etiologic diagnosis, prevention and immunization against CHV-1 in dogs from Southern Brazil.

O herpesvírus canino (CHV-1) é um patógeno de cães que possui distribuição mundial e que causa infertilidade, abortos e doença sistêmica severa em filhotes de cães. Achados clínicos tem indicado a circulação do CHV-1 em cães no Brasil, embora o diagnóstico definitivo seja raramente determinado. Este artigo descreve os achados clinicopatológicos de quatro casos/surtos independentes de morte neonatal de filhotes de cães da raça Bulldog causados pelo CHV-1, a identificação e a caracterização genética do vírus. Três eventos ocorreram no mesmo canil que abriga animais de diferentes raças em idade reprodutiva (março de 2013, outubro de 2013 e abril de 2014). Filhotes de três ninhadas de Bulldog Francês e/ou Inglês, com idade de 9 a 30 dias, foram afetados e apresentaram dispneia, respiração agônica, mucosas pálidas, dor e tensão abdominal, que evoluíram para morte dos cães dentro de, aproximadamente, 24 horas. Na necropsia foram observados hepatite necro-hemorrágica, nefrite necro-hemorrágica multifocal e moderada e pneumonia intersticial fibrinonecrótica. O isolamento viral foi positivo em amostras clínicas de um filhote e DNA de CHV-1 foi detectado por PCR em tecidos de filhotes de todos os surtos. Teste de soroneutralização com amostras de soro de cães provenientes do canil afetado revelaram que nove de 12 animais adultos possuíam altos títulos de anticorpos para o CHV-1. Sequenciamento de nucleotídeos do gene das glicoproteínas B, C e D revelaram 99-100% de identidade entre as amostras e com as sequências de CHV-1 disponíveis no GenBank. A análise filogenética baseada na sequência do gene da glicoproteína C mostrou uma segregação das amostras, mesmo entre os três isolados de vírus provenientes do mesmo canil. Esses achados demonstram que o CHV-1 é a causa da doença e da morte dos filhotes, reforçando a necessidade do correto diagnóstico etiológico e a implementação de medidas de prevenção e imunização contra o CHV-1 em cães no sul do Brasil.

nzimas y glicoproteínas presentes en extractos de vermes adultos de Fasciola hepatica / Enzymes and glycoproteins present in extracts of adult Fasciola hepatica worms

Fasciola hepatica es un trematodo que causa lesiones en el hígado y vías biliares afectando a herbívoros y al hombre, constituyendo un problema de salud pública en zonas agrícolas a nivel mundial. El parásito posee glicoproteínas y enzimas que facilitan su penetración y migración en los tejidos hospederos. El objetivo fue evaluar estos componentes en extractos [fracción soluble (FS) y fracción particulada (FP)] de vermes adultos de F. hepatica. Las fracciones fueron analizadas para proteínas, carbohidratos, actividades enzimáticas, y por electroforesis (SDS-PAGE-15%) en condiciones no reductoras (NR) y reductoras (R). En FS, la concentración de carbohidratos fue 5,63 μmol/mL; se detectó la presencia de fosfohidrolasas, glicosidasas y peptidasas, sobresaliendo la actividad Fosfatasa Acida (1,19 μmol/h/mg, pH 5,0). En FP, la concentración de carbohidratos fue más elevada (7,89 μmol/mL); se observaron valores elevados de Fosfatasa Alcalina (5,79 μmol/h/mg), Fosfatasa Acida (1,67 μmol/h/mg) y moderados de Fosfodiesterasa (0,280 μmol/h/mg pH 9,6). Se detectó actividad Acetilcolinesterasa mayor en FS que en FP (3,95 A/h vs. 1,68 A/h). En SDS-PAGE ambos extractos mostraron polipéptidos de ~80 a 10-kDa; el pre-tratamiento de las muestras con sodio-metaperiodato redujo el número de bandas en cada extracto, sugiriendo la presencia de glicocomponentes. En conclusión, se hallaron enzimas y glicocomponentes en los extractos de F. hepatica estudiados, lo cual constituye un aporte en la búsqueda de posibles blancos inmunológicos y farmacológicos para el control de esta parasitosis.

Fasciola hepatica is a trematode that causes damage to the liver and biliary tract in both herbivores and man, and is thus an important public health concern in agricultural areas worldwide. This parasite contains glycoproteins and enzymes that facilitate its penetration of, and migration through, host tissues. The aim of this study was to evaluate the relative proportions of these components in the soluble fraction (SF) and n-butanol-solubilized extracts of the particulate fraction (PF) of whole homogenates of adult F. hepatica worms. Extracts were analyzed for protein and carbohydrate content, and hydrolytic activity. In addition, 15% SDS-PAGE electrophoresis was performed under non-reducing (NR) and reducing (R) conditions to identify other components. The SF contained 5.63 μmol carbohydrate/mL, as well as phosphohydrolases, glycosidases and peptidases, with a high acid phosphatase activity (1.19 μmol/h/mg, pH 5.0) that seemed to be characteristic of this fraction. The PF contained 7.89 μmol carbohydrate/mL, with high alkaline phosphatase (5.79 μmol/h/mg) and acid phosphatase (1.67 μmol/h/mg), and moderate phosphodiesterase (0.280 μmol/h/mg pH 9.6) values. Acetylcholinesterase activity was higher in the SF than the PF (3.95 A/h vs. 1.68 A/h). SDS-PAGE analysis showed the presence of polypeptides in both the SF and the PF of ~80 to 10-kDa . Pretreatment with sodium-metaperiodate reduced the number of bands in each extract suggesting the presence of glycocomponents. The notable presence of enzymes and glycocomponents in the SF and PF extracts of adult F. hepatica worms is a first step towards the eventual identification of new immunological and pharmacological targets for the control of this disease.

Clonagem das glicoproteínas transmembrana G e F de um isolado brasileiro do vírus respiratório sincicial bovino em sistema procarioto / Cloning of the transmembrane glycoproteins G and F from a Brazilian isolate of bovine respiratory syncytial virus in a prokaryotic system

The aim of this work was the cloning of those transmembrane glycoproteins G and F from an isolate bovine respiratory syncytial viruses (BRSV) - a Brazilian isolate of BRSV, named BRSV-25-BR in previous studies, in a prokaryotic system to proceed the sequencing of larger genomic fragments. The nucleotide substitutions were confirmed and these clones may also be used in further studies regarding the biological effects of those proteins in vitro and in vivo.

O objetivo deste trabalho foi a clonagem das glicoproteínas transmembrana G e F de um isolado de vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) - um isolado brasileiro denominado BRSV-25-BR- que já demonstrou possuir mutações em regiões altamente conservadas do gene da proteína G - em sistema procariótico, com o intuito de sequenciar fragmentos genômicos maiores. As substituições de nucleotídeos foram confirmadas e tais clones podem ser utilizados em futuros estudos sobre os efeitos biológicos destas proteínas tanto in vitro como in vivo.

Avaliação do efeito da Artin M no processo de reparação em mucosa mastigatória / Evaluation of Artin M on wound healing in palatal mucosa

Artin M é uma lectina purificada de sementes de Artocarpus heterophyllus que, recentemente, mostrou-se capaz depromover aceleração da cicatrização de lesões por queimadura de pele ou por abrasão da córnea em ratos e coelhos. O objetivo desta tese foi avaliar os efeitos da Artin M no processo de reparação da mucosa mastigatória bucal, por meio de modelos de estudo in vivo. Primeiro estudo: Três feridas cirúrgicas circulares de 6 mm de diâmetro foram criadas na mucosa palatina de 20 cães, e divididas aleatoriamente em 3 grupos de acordo com os tratamentos: C ­ controle (não tratados), A - Artin M, V - veículo. Quatro animais de cada grupo foram sacrificados após 2, 4, 7, 14 e 21 dias pós tratamento e suas maxilas analisadas clinicamente quanto ao padrão de cicatrização, seguido de análise histológica, imuno-histoquímica para antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) e atividade de mieloperoxidase. Clinicamente, o grupo A demonstrou melhor cicatrização em todos os períodos quando comparada aos outros grupos (p<0,05). A análise histológica mostrou ter havido no grupo A maior estimulação na produção de fibras colágenas, maturação do tecido de granulação e organização do epitélio. A imunolocalização de PCNA mostrou uma maior tendência na proliferação celular em lesões do grupo A principalmente nos dias iniciais (p<0,05). O influxo de neutrófilos mostrou-se estatisticamente aumentado no grupo A quando comparado aos outros grupos nos dias 2 e 4 (p<0,05). Conclui-se que a Artin M promoveu aceleração na reparação das feridas na mucosa mastigatória em cães, via recrutamento de neutrófilos e indução da proliferação celular. É bem conhecido o envolvimento de mediadores biológicos como citocinas e fatores de crescimento liberados pelas diferentes células no processo de reparação tecidual. Portanto, tendo em vista os resultados obtidos no primeiro modelo visamos avaliar a resposta ao tratamento tópico do gel de Artin M na mucosa mastigatória de rato. Segundo estudo: Feridas cirúrgicas circulares de 4 mm de diâmetro foram criados na mucosa palatina de 72 ratos Wistar, divididos aleatoriamente de acordo com o tratamento realizado nas lesões em 3 grupos: C ­ controle (não tratados), A -Artin M, V - veículo. Após 3, 5 e 7 dias pós-tratamento, 8 animais de cada grupo foram sacrificados e suas hemimaxilas foram divididas para realização da análise histológica; imuno-histoquímica para PCNA, bFGF, VEGF e TGF-ß; expressão protéica das citocinas pró-inflamatórias IL-1, IL-6 e TNFα, e dos fatores de crescimento VEGF e TGF-ß por ELISA. A análise histológica mostrou que no grupo A houve estimulação na regeneração e organização do epitélio, na produção de fibras colágenas e maturação do tecido de granulação e diminuição estatisticamente significante no infiltrado inflamatório no dia 7 quando comparado aos outros grupos (p<0,05). A análise imuno-histoquímica mostrou maior expressão de TGF-ß e VEGF no dia 3 (p<0,05) e maior proliferação celular no dia 5 (p<0,05) no grupo A. Além disso, maior expressão protéica de TGF-ß e VEGF nas lesões tratadas pelo Artin M foi confirmada pela ELISA no dia 3 (p<0,05). Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que a aplicação tópica de gel de Artin M promoveu a reparação da mucosa mastigatória de ratos através estimulação na produção de TGF-ß e VEGF, proliferação celular, deposição de colágeno e reepitelização

Artin M, lectin from Artocarpus heterophyllus seeds, has been demonstrated to stimulate recruitment and activation of neutrophil and mast cells. Furthermore, it has been shown to accelerate the process of wound healing on burn injuries and corneal epithelial lesions in rats and rabbits, respectively. The aim of this study was to evaluate the effects of Artin M on wound healing in palatal mucosa in two animal models. Study 1: Three wounds of 6 mm full thickness were surgically created in the hard palate mucosa of twenty dogs. The wounds of each animal were randomly divided into three groups according to one of the treatment assigned: C­ Control (nontreated), A- Artin M gel, and V­ Vehicle (carboxymethylcellulose 3% gel). Four animals per group were sacrificed at 2, 4, 7, 14 and 21 days post-surgery. Before sacrifice, wounded areas were photographed and scored for macroscopic healing evaluation. Afterwards, maxillary tissue were harvested and divided to perform histological analysis, immunohistochemical staining against Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) and measurement of myeloperoxidase activity. Clinical analysis showed that wound closure was accelerated in group A in comparison to other groups in all periods. Histological features showed enhanced reepithelization and collagen fiber formation resulting in faster maturation of granular tissue in group A compared to the other groups, by day 14. Artin M treatment significantly induced cells proliferation at day 2 and 4 (p<0.05). Neutrophils infiltration in the group A was significantly higher than in the other groups at days 2 and 4 (p<0.05). The results suggest that Artin M gel may potentially facilitate wound healing on palatal mucosa via the recruitment of neutrophils and promotion of cells proliferation. It is well known that cytokines and growth factors released from different cells coordinate the healing process. Therefore, based on previous results we evaluated the effects of topical application of Artin M on wound healing in palatal mucosa of rats. Study 2: Seventy-two rats were divided into three groups according to one of the treatment assigned: C­ Control (non-treated), A- Artin M gel, and V­ Vehicle (carboxymethylcellulose 3% gel). A 4 mm full thickness wound was surgically created on the palatal mucosa of each animal. Eight animals per group were sacrificed at 3, 5, and 7 days post-surgery. Maxillary biopsies were harvested and divided to perform histological analysis, imunohistochemical analysis for bFGF, PCNA TGF-ß and VEGF and ELISA assay to evaluate levels of IL-1, IL-6, TNFα, TGF-ß and VEGF. Histological features showed faster reepithelization in group A, significant decrease in inflammatory cells infiltration by day 7 (p<0.05) and increased collagen fiber formation resulting in faster maturation of granular tissue compared to the other groups. Also, Artin M significantly induced cells proliferation at day 5 (p<0.05). Significantly higher expression of TGF-ß and VEGF were observed in group A compared to C at day 3 (p<0.05). In conclusion, the single application of Artin M gel has shown to be effective in the healing of oral mucosa wound in rats by enhancing TGF-ß and VEGF release, cell proliferation, reepithelization, collagen deposition and arrangement of collagen fibers. These findings may partially explain potential pharmacological actions of Artin M on promoting wound healing process

Brain sweet brain: importance of sugars for the cerebral microenvironment and tumor development / Cérebro doce cérebro: importância dos açúcares para o microambiente cerebral e o desenvolvimento tumoral

The extracellular matrix (ECM) in the brain tissue is a complex network of glycoproteins and proteoglycans that fills the intercellular space serving as scaffolding to provide structural framework for the tissue and regulate the behavior of cells via specific receptors - integrins. There is enormous structural diversity among proteoglycans due to variation in the core protein, the number of glycosaminoglycans chains, the extent and position of sulfation. The lectican family of proteoglycans interacts with growth factors, hyaluronan and tenascin forming a complex structure that regulates neuronal plasticity and ion homeostasis around highly active neurons. In this review, we will discuss the latest insights into the roles of brain glycoproteins as modulators of cell adhesion, migration, neurite outgrowth and glial tumor invasion.

A matriz extracelular (ECM) no tecido cerebral é formada por uma rede complexa de glicoproteínas e proteoglicanas que preenchem o espaço intercelular participando como estrutura de sustentação do arcabouço tecidual regulando a função celular por interações com receptores específicos - as integrinas. Existe enorme diversidade estrutural entre as proteoglicanas, devido à variação na proteína central (core), à quantidade de cadeias de glicosaminoglicanas, ao grau e posição de grupamentos sulfato na molécula. As proteoglicanas lecticanas interagem com fatores de crescimento, com hialuronana e tenascina formando uma estrutura complexa regulando a homeostase de íons e a plasticidade neuronal. Neste artigo de revisão serão apresentados dados relevantes da literatura sobre o papel das glicoproteínas no microambiente do tecido cerebral, como moduladores da neuritogênese, da adesão, migração celular e invasividade de células tumorais de origem glial.

Glycoconjugates and polysaccharides of fungal cell wall and activation of immune system / Glicoconjugados e polissacarídios de parede celular de fungos e ativação do sistema imune

The fate of organochlorine 14C-dicofol in activated sludge process was investigated. Results showed that the major part of radioactivity remained adsorbed on biological sludge. Consequently, its final disposal deserves special attention. The small amounts of dicofol, biotransformed or not, which remained in the treated effluent could contaminate receiving bodies.

Glicoproteínas, glicoesfingolipídios e polissacarídios, expostos nas camadas mais externas da parede celular dos fungos, estão envolvidos em diferentes tipos de interações com o ambiente extracelular. Essas moléculas são componentes essenciais desses organismos, contribuindo para a estrutura, integridade, crescimento celular, diferenciação e sinalização. Alguns são compostos imunologicamente ativos com potencial para regular a patogênese e a resposta imune do hospedeiro, Algumas dessas estruturas podem ser especificamente reconhecidas por anticorpos presentes no soro de pacientes, sugerindo uma possível utilização como ferramenta no diagnóstico das infecções fúngicas.

Construction and characterization of a bovine herpesvirus 5 mutant with a deletion of the gI, gE and US9 genes

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is a important cause of viral encephalitis in cattle in South America. Within the framework of developing a differential vaccine against BoHV-5, a deletion mutant was constructed based on a Brazilian BoHV-5 isolate. The target of the deletions were genes that code proteins implicated in the neurovirulence of BoHV-5, the glycoprotein I (gI), glycoprotein E (gE) and membrane protein US9. To construct the deletion mutant of BoHV-5, the flanking regions of all three genes were cloned in a prokaryotic plasmid. This deletion fragment was co-transfected with the viral DNA into bovine cells. Identification of deletion mutants was performed by immunostaining with an anti-gE monoclonal antibody. One of the gE negative viral populations found was purified, amplified and further examined by restriction endonuclesase analysis of its genomic DNA. The plaque sizes and penetration kinetics of the deletion mutant and wild type viruses were compared. The plaque sizes of the deletion mutant were significantly smaller than those of the parental strain (p <= 0.05), but no statistical differences were observed in penetration kinetics. The results indicate that the gI/gE/US9 deletion mutant of BoHV-5 may have a reduced virulence in the host and is still viable enough to be a good candidate for the development of a BoHV-5 vaccine.

O herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é uma causa importante de encefalite viral em bovinos na América do Sul. Buscando o desenvolvimento de uma vacina diferencial contra o BoHV-5, um mutante deletado foi construído com base em um isolado brasileiro deste vírus. O alvo das deleções foram genes que codificam proteínas implicadas na neurovirulência do BoHV-5, a glicoproteína I (gI), a glicoproteína E (gE) e a proteína de membrana US9. Para construir o mutante deletado de BoHV-5, as regiões flanqueadoras dos três genes foram clonadas em um plasmídeo procarioto. Este fragmento de deleção foi co-transfectado com o DNA viral em células de bovinos. A identificação dos mutantes deletados foi feita por meio da técnica de imunoperoxidase com um anticorpo monoclonal anti-gE. Uma das populacões virais gE negativas encontradas foi purificada, amplificada e seu genoma foi examinado por análise de restrição enzimática. Os tamanhos de placas virais e taxas de penetração do vírus mutante foram determinados e comparados com os do vírus selvagem. As placas virais do vírus mutante deletado foram significativamente menores do que as do vírus selvagem (p <= 0,05), mas não foram encontradas diferenças significativas quando comparadas as taxas de penetração dos dois vírus. Estes resultados indicam que o vírus mutante deletado gI/gE/US9 de BoHV-5 pode apresentar virulência reduzida e é viável o suficiente para ser um bom candidato para o desenvolvimento de uma vacina contra o BoHV-5.

Efeito protetor de antagonista das gliproteínas IIb/IIa nas alterações hepáticas e pulmonares secundárias à isquemia e reperfusão do fígado em ratos / Protective effects of an inhibitor of glycoprotein IIb/IIIa in the hepatic and pulmonary disturbances secondary to ischemia and reperfusion injury of rat’s liver

RACIONAL: A lesão de isquemia e reperfusão hepática é um evento comum e responsável por considerável morbidade e mortalidade. OBJETIVO: Avaliar efeitos de inibidor da glicoproteína IIb/IIIa, cloridrato de tirofiban, nas alterações hepáticas e pulmonares da lesão de isquemia e reperfusão de fígado de ratos. MÉTODO: Vinte e três ratos Wistar divididos em três grupos: laparotomia (n = 6), isquemia e reperfusão que receberam solução fisiológica (n = 8), e submetidos a isquemia e reperfusão e tratados com o cloridrato de tirofiban (n = 9). Foram realizadas dosagens das aminotransferases e análise histológica hepática. Avaliação pulmonar foi realizada pelo teste do azul de Evans e pela dosagem tecidual da mieloperoxidase no parênquima pulmonar. A oxidação e fosforilação mitocondrial das células hepáticas também foram avaliadas. RESULTADOS: O grupo tratado com cloridrato de tirofiban apresentou menores níveis de aminotransferases, assim como alterações histológicas menos intensas. Avaliação pulmonar demonstrou diminuição no teste de azul de Evans no grupo tratado com cloridrato de tirofiban. Grupo tratado com cloridrato de tirofiban apresentou aumento significativo do estado 3 da respiração mitocondrial e das relações adenosina difosfato utilizado para fosforilação sobre o oxigênio consumido na reação e de coeficiente respiratório. CONCLUSÕES: O uso do cloridrato de tirofiban exerceu papel protetor da lesão hepática de isquemia e reperfusão e impediu o aumento da permeabilidade vascular secundária à lesão de reperfusão hepática.

BACKGROUND Hepatic ischemia-reperfusion injury is responsible for a considerable morbidity and mortality. Aim - To evaluate the effect of a platelet glycoprotein IIb/IIIa receptor inhibitor (tirofiban) on hepatic and pulmonary disturbances associated with hepatic ischemia-reperfusion injury. METHODS: Twenty-three Wistar rats divided in three groups: rats sham-operated (n = 6), rats submitted to ischemia-reperfusion that received saline solution (n = 8), and rats submitted to ischemia-reperfusion treated with 0.7 mg/kg of tirofiban (n = 9). Serum aminotransferases (AST and ALT) were also determined, and the study of hepatic tissue histology was carried out. The evaluation of the pulmonary disturbances was done using the Evans blue test and the tissular determination of myeloperoxidase. Hepatic mitochondrial oxidation and phosphorylation were also measured. RESULTS: There was an increase in the state 3 respiration, ADP/O ratio and respiration control rate in the group treated with tirofiban. This group had also lower levels of aminotransferases and the histological findings were significantly less intense. Pulmonary evaluation demonstrated decrease of the Evans blue test in the tirofiban group and an increase of its tissular determination of myeloperoxidase. CONCLUSION: The inhibition of glycoprotein IIb/IIIa receptor with tirofiban protected the hepatic disturbances and prevented the increase of pulmonary vascular permeability secondary to the ischemia-reperfusion injury of the liver.